CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DA ENZIMA ADENINA FOSFORIBOSILTRANSFERASE (APRT) DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

Resumo

A tuberculose humana é uma das doenças mais preocupantes da atualidade. A cada ano, esta patologia faz 1,7 milhões de vítimas em todo o mundo. Além disso, de acordo com o último levantamento da OMS, em 2009, 9,4 milhões de indivíduos desenvolveram a doença. Baseado nesses dados, é fundamental buscar novos alvos para combater o principal agente causador desta doença em humanos, o Mycobacterium tuberculosis. A busca por novos alvos pode permitir o desenvolvimento de drogas mais eficazes, que diminuam o tempo de tratamento da tuberculose e que ofereçam menos reações adversas. Uma proteína ainda não explorada no bacilo é a adenina fosforibosiltransferase (APRT). Esta enzima é responsável por catalisar uma reação entre PRPP e base adenina livre, para formar AMP e PPi. Sabe-se que esta enzima tem um papel bastante importante na via de salvamento de purinas, uma rota metabólica dentro do metabolismo de nucleotídeos. Ela já foi estudada em diversos organismos, incluindo seres humanos, a bactéria Escherichia coli e diferentes eucariotos basais como espécies do gênero Leishmania. Este projeto tem como objetivo caracterizar os processos bioquímicos básicos desta enzima. Para isso, o gene apt da cepa laboratorial H37Rv de Mtb precisa ser amplificado por PCR e clonado em vetores plasmidiais. A proteína então será superexpressa em células de E. coli, purificada por HPLC para remover os contaminantes e caracterizada por ensaios enzimáticos utilizando um espectrofotômetro.